如何提高和确定siRNA 转染的效率？

　　siRNA 转染需要合适的转染试剂和转染方法来进行体外和体内RNA实验。其转染试剂的选择要求如下：选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验有很大影响，它直接影响实验的结论和结果，因此必须选择低毒性转染试剂，以观察转染试剂的毒性是否较低。有一个简单的方法，看转染的过程和要求，比如要求的细胞密度越大，说明毒性越大，例如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短，说明毒性越大。除了低毒性，好操作简便，例如有的转染试剂要求转染前换无血清培养基或低血清培养基，转染后又要有血清培养基。实际上，由于培养条件的频繁变化，可能会对细胞表达模式产生影响，对后续的mRNA和蛋白分析也同样产生影响，终影响实验的可靠性。

　　如何提高和确定siRNA 转染的效率？

　　对于难转染的细胞的转染，如何提高转染效率的问题也是目前研究的技术难题。一般建议使用电转的方法，但是由于电转的方法对细胞损伤比较大，该方法也未必是最佳的。转染效率的确定，常用的是使用荧光标记的siRNA，通过荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪检测的方法。

　　优化siRNA 转染条件的方法有什么？转染后出现细胞死亡是什么原因？

　　转染后细胞死亡，原因也是多样的，如脂质体毒性，转染浓度过高，转染前的细胞状态不佳等都可能导致转染后细胞死亡的情况发生，这种情况下就需要适当优化转染条件；可以选择细胞毒性小的非脂质体类的转染试剂，另外，如果siRNA所靶向的基因对于维持细胞生长是非常重要的，出现细胞死亡的现象可能正是由于基因干扰引起的，如果由于细胞死亡而影响检测的话，可以适当调整检测时间。实验条件的优化，包括转染前细胞密度调整，转染浓度，检测时间等。