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如何提高和确定siRNA 转染的效率?

发表时间:2022-11-18      点击次数:394
  siRNA 转染需要合适的转染试剂和转染方法来进行体外和体内RNA实验。其转染试剂的选择要求如下:选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验有很大影响,它直接影响实验的结论和结果,因此必须选择低毒性转染试剂,以观察转染试剂的毒性是否较低。有一个简单的方法,看转染的过程和要求,比如要求的细胞密度越大,说明毒性越大,例如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短,说明毒性越大。除了低毒性,好操作简便,例如有的转染试剂要求转染前换无血清培养基或低血清培养基,转染后又要有血清培养基。实际上,由于培养条件的频繁变化,可能会对细胞表达模式产生影响,对后续的mRNA和蛋白分析也同样产生影响,终影响实验的可靠性。
  如何提高和确定siRNA 转染的效率?
  对于难转染的细胞的转染,如何提高转染效率的问题也是目前研究的技术难题。一般建议使用电转的方法,但是由于电转的方法对细胞损伤比较大,该方法也未必是最佳的。转染效率的确定,常用的是使用荧光标记的siRNA,通过荧光显微镜,共聚焦显微镜,流式细胞仪检测的方法。
  优化siRNA 转染条件的方法有什么?转染后出现细胞死亡是什么原因?
  转染后细胞死亡,原因也是多样的,如脂质体毒性,转染浓度过高,转染前的细胞状态不佳等都可能导致转染后细胞死亡的情况发生,这种情况下就需要适当优化转染条件;可以选择细胞毒性小的非脂质体类的转染试剂,另外,如果siRNA所靶向的基因对于维持细胞生长是非常重要的,出现细胞死亡的现象可能正是由于基因干扰引起的,如果由于细胞死亡而影响检测的话,可以适当调整检测时间。实验条件的优化,包括转染前细胞密度调整,转染浓度,检测时间等。
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